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一、杂质研究
在杂质研究方面的具有较强的专业能力，基于ICH Q3指导原则建立完整的杂质研究体系。解决中药注射剂行业关键共性问题，研究、起草中药注射剂科学合理、高标准、相对统一的安全性质量检测指标研究技术规范。药品的质量指标可分成安全性、有效性、稳定性、均一性四个维度进行评价，本文件的起草是参考《中药注射剂安全性再评价质量控制评价技术原则（试行）》的要求，在《中华人民共和国药典》2020年四部通则“0102 注射剂”及《中药注射剂安全性再评价质量控制要点》要求质量检测的常规指标“蛋白质、鞣质、树脂、草酸盐、钾离子、细菌内毒素（或热原）、溶血与凝聚、异常毒性、过敏反应、降压物质、炽灼残渣、可见异物、不溶性微粒、无菌”基础上，提高“残留溶剂、元素杂质”研究技术，并新增“5-羟甲基糠醛、吐温-80含量控制、高分子物质检测、类过敏反应”等更有安全性质量检测意义指标的研究技术方法，为进一步提高中药注射剂的质量标准，特别是安全性质量控制提供技术保障。
杂质控制策略：
杂质限度制定依据
分析方法灵敏度验证
杂质检测方法学验证
稳定性中的杂质监测
遗传毒性杂质（ICH M7）研究策略：
风险评估
控制策略
分析方法（高灵敏度）
限度计算（基于TTC）
研究方法：
采用HPLC-MS/MS进行组分鉴定
分离和鉴定各组分对照品
制定合理的组分限度
1、元素杂质
基本方法：
一般优先考虑采用电感耦合等离子体质谱法（ICP-MS法）。以下具体方法如不适用，可根据各品种实际情况适当调整。
仪器参数：
射频功率：1550 W；蠕动泵转速：0.3 rps； 等离子气体：15 L/min；辅助气体：0.2 L/min；载气流速：1.05 L/min。
2、高分子物质
高效分子排阻色谱法（HPSEC法）：采用《中华人民共和国药典》（2025年版）四部通则“0512 高效液相色谱法”进行测定。以下具体方法如不适用各品种，可根据实际情况适当调整。
以凝胶为填充剂（TSK G2000 SWxl凝胶色谱柱，7.8 mm×300 mm，5 μm或效能相当的色谱柱）；以乙腈-0.03%三氟乙酸溶液（30 : 70）为流动相；检测器为蒸发光散射检测器或电雾式检测器或紫外-可见分光检测器（检测波长为214 nm或其他最大吸收波长）
质谱法（MS法）：采用《中华人民共和国药典》（2025年版）四部通则“0431 质谱法”进行测定。离子源：选择电喷雾离子化（ESI），或快原子轰击（FAB）/快离子轰击离子化（LSIMS），或基质辅助激光解吸离子化（MALDI）； 质量分析器：选择四级杆串联飞行时间分析器（TOF），或其他可用于测定分子量在1000以上的串联质谱。
3、5-羟甲基糠醛
采用《中华人民共和国药典》（2025年版）四部通则“0512 高效液相色谱法”进行测定。以下具体方法如不适用各品种，可根据实际情况适当调整。以氨基键合硅胶为填充剂（Shodex Asahipak NH2P-504E为色谱柱，4.6 mm×250 mm，5 μm或效能相当的色谱柱）；以乙腈为流动相A，水为流动相B，按表6中的规定进行梯度洗脱。
4、吐温80
采用高效液相色谱法，凝胶色谱柱， 柱温为30 ℃； 以0.02 mol/L醋酸铵溶液-乙腈（90:10） 为流动相， 流速为0.6ml/min,蒸发光散射检测器， 漂移管温度120 ℃， 氮气流速2.0L/min，建立样品中吐温80的含量可以有效控制制剂质量。
二、特征图谱/指纹图谱
中药注射剂指纹图谱研究的核心是建立一种稳定、专属、信息丰富、可量化的化学表征方法。其技术链条贯穿 “样品代表性—方法科学性—验证严谨性—评价合理性—应用关联性” 。未来，随着分析技术和数据科学的发展，指纹图谱将从质量控制工具，逐步升级为连接化学物质群与临床疗效/安全性的核心科学研究平台。
经质量研究明确结构的成份，应当在指纹图谱中得到体现，一般不低于已明确成份个数的90%；指纹图谱应当全面反映注射剂所含成份的信息。
1、核心目标与原则
整体性：体现中药多组分协同作用的特点，对注射剂中尽可能多的化学成分进行整体表征。
专属性：图谱必须能有效区分不同品种、不同厂家、不同批次的样品，并能检测到原料、工艺的微小变化。
稳定性：方法需稳定可靠，图谱具有良好的重现性。
相关性：图谱特征（峰群）应与药效/安全性建立关联（谱效关系或谱毒关系），这是指纹图谱研究的终极价值。
2、关键技术要点
样品制备与代表性：
必须收集足够数量的代表性样品（通常≥10批），包括：不同批次的合格成品。关键中间体（如提取物、浓缩液）。不同来源/产地的合格原料药材（用于溯源）。工艺变动前后的样品（用于工艺监控）。
前处理优化：
根据化学成分性质（极性、酸碱性、挥发性等）优化提取、富集、过滤等方法，确保能全面、稳定地反映产品化学特征。
3、分析方法的建立与选择
首选方法：
高效液相色谱法是最常用、最成熟的技术，尤其配合二极管阵列检测器，可提供丰富的紫外光谱信息。
气相色谱法：适用于挥发性成分（如挥发油等）。
毛细管电泳法：适用于离子型、大极性成分。
联用技术：
HPLC-MS/MS（液相色谱-串联质谱）或 GC-MS（气相色谱-质谱）是核心技术趋势，不仅能提供色谱峰，还能在线进行成分鉴定，极大提升指纹图谱的信息量和专属性。
4、方法学验证
指纹图谱分析方法必须进行严格验证，包括：精密度、重复性、中间精密度。
稳定性：考察样品溶液在不同时间段的稳定性。
耐用性：考察色谱柱、仪器、流动相比例微小变动对图谱的影响。
系统适用性：明确关键分离度、理论塔板数、拖尾因子等要求。
5、参照物的选择
内参比峰：
选择样品中固有、稳定、中等保留时间、含量适中的已知活性成分的色谱峰作为参照峰，用于计算相对保留时间和相对峰面积。
外标物：
用于成分鉴别和含量测定，但不一定作为指纹图谱的参照峰。
6、指纹图谱的建立与评价
图谱采集与数据处理：
在统一条件下采集所有代表性样品的图谱，进行色谱峰识别、匹配和校准。
共有模式生成：
通过统计分析（如均值法）生成能代表该品种特性的 “对照指纹图谱”（或称共有模式）。
直观比对评价：
观察样品图谱与对照指纹图谱的整体相似性。
相似度评价：
采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统（国家药典委员会推荐），计算相关系数。相似度通常要求≥0.90（或企业内控标准更高）。这是目前最核心的量化评价指标。
多元统计分析：
采用主成分分析、聚类分析等模式识别技术，更深入地挖掘批次间的差异和一致性。
关键峰监控：
确定一组 “特征峰”（如8-15个），并规定其相对保留时间的范围和相对峰面积的比例范围。
7、成分鉴定与谱效关联
组分鉴定与定性：
未知成分结构鉴定（分离纯化未知对照品）、遗传毒性杂质评估、潜在杂质预测、指纹图谱对比分析。
色谱峰指认/鉴定：
利用HPLC-MS/MS、对照品比对等技术，对主要色谱峰、尤其是特征峰进行化学成分鉴定。这是提升指纹图谱科学内涵的关键。
谱效/谱毒关系研究：
将指纹图谱的化学特征（如特征峰的峰面积）与药效学实验或毒性检测数据进行统计学关联分析（如灰色关联度、偏最小二乘回归等），寻找潜在的药效物质群或毒性预警成分。
三、多指标成分含量测定
中药注射剂多指标含量测定的技术核心在于：以科学原则选择关键质控成分，建立并完全验证一个专属性强、准确精密的分析方法，并设定合理的含量限度。它与指纹图谱共同构成了保障中药注射剂“安全、有效、质量均一”的现代化学质量控制体系的支柱，且正朝着更精准、更高效、更关联临床的方向不断发展。
1、明确核心原则与目标
有效成份注射剂：单一主成份含量≥总固体的 90%。
多成份注射剂：所有“结构明确成份”的总含量≥总固体的 60%。
质量标准覆盖度要求：质量标准中规定的所有被测成份（即建立了含量测定项的成份）的总含量，应≥总固体的80%。
控制逻辑：这构成了一个递进的质控框架——首先保证总体的化学物质清晰度（目标1和2），进而确保质量标准能有效地代表和控制这个主体（目标3）。
2、建立多指标含量控制体系的操作流程
阶段一：前期研究与分析（奠基阶段）
确定“总固体”：通过干燥失重或炽灼残渣等方法，准确测定注射剂（扣除辅料后）的总固体含量（单位：mg/ml 或 %）。这是所有计算的基准。
全面化学表征：运用指纹图谱（HPLC-DAD, LC-MS等）对注射剂进行全成分扫描。尽可能多地指认和鉴定色谱峰，明确其化学结构。这是区分“结构明确成份”与“未知成份”的基础。
成分分类与筛选：将所有成分分为结构明确成分（已鉴定）和 结构不明确/未知成分（如聚合物、部分降解物、未知小峰等）。从“结构明确成分”中，根据有效性（君药、臣药主要活性成分）、安全性（有毒成分限量）、代表性（覆盖各药味、各化学类型）三大原则，筛选出需要建立含量测定的候选指标成分。
阶段二：建立含量测定方法并验证
方法开发：通常采用HPLC多波长检测或LC-MS/MS方法，以实现对多个化学性质差异大的成分进行同时、准确的定量。
方法必须经过完整的方法学验证（专属性、线性、精密度、准确度、耐用性等）。
测定各指标成分的绝对含量：用已验证的方法，测定多批有代表性样品中每个指标成分的绝对含量（单位：mg/ml）。
阶段三：计算、评估与指标确定（核心决策阶段）
这是将测定数据与您提出的要求进行比对和决策的关键步骤。
计算“结构明确成分总含量”：这是所有已鉴定成分的含量之和（不仅仅是质量标准中测定的那几个）。这需要基于全面的成分鉴定研究进行估算，可能涉及使用“一测多评”或半定量手段来估算未建立法定含量测定方法的已知成分。
验证是否符合多成份制剂要求：（结构明确成分总含量/总固体量）×100%≥60%。
如果低于60%，说明产品化学物质基础不清晰，需要进一步研究，优化工艺以富集有效成分，或深化成分鉴定研究。
计算“质量标准控制成分总含量”：这是指最终写入质量标准的那些含量测定项所测成分的含量之和。
决策与优化：首先，计算当前选定的几个指标成分的总和占总固体的百分比。如果该百分比≥80%，则已满足要求。如果< 80%，则必须增加含量测定的指标成分，直到总和超过80%的阈值。这意味着可能需要增加测定一些中等含量或次要活性成分。
案例推演（多成份注射剂）：假设某注射剂总固体为 100 mg/ml。
经研究，其所有结构明确成分的总含量为 70 mg/ml（占70%， > 60%，符合多成份制剂要求）。
初期选定3个主要成分A、B、C建立含量测定，其含量分别为：30, 20, 15 mg/ml，总和为 65 mg/ml（占65%， < 80%，不达标）。
行动：需要增加至少一个含量≥15 mg/ml 的已知成分D进入质量标准。若D含量为10 mg/ml，则A+B+C+D = 75 mg/ml（占75%），仍不足。需继续增加成分E（含量8 mg/ml），则总和达到83 mg/ml（>80%），达标。
此时，质量标准中需包含对A、B、C、D、E五个成分的含量测定。
3、方法学验证
根据ICH、CP等指南，对定量方法进行全面验证：
专属性/特异性：证明目标峰不受辅料、杂质、降解产物等干扰（通过与空白辅料、破坏性试验样品对比，或使用MS检测器确认）。
线性与范围：覆盖待测成分可能含量范围的80%-120%，相关系数r通常要求>0.999。
重复性：同一人、同一天、同一样品多次进样的RSD。
中间精密度：不同日期、不同分析员、不同仪器的RSD。RSD一般要求≤2.0%（含量较高时）。
准确度（加样回收率）：在已知含量的样品中加入低、中、高三个水平的对照品，计算回收率（通常要求95%-105%，RSD≤3%）。这是关键验证项。
检测限与定量限：尤其对毒性成分或痕量成分，需验证方法的灵敏度。
耐用性：考察色谱柱品牌、柱温、流速、pH值微小波动对测定结果的影响，确定方法的可操作空间。
溶液稳定性：考察对照品溶液和供试品溶液在规定时间内的稳定性。
成都普思生物科技股份有限公司成立于2005年，是一家专注于天然产物分离纯化及中药药学研究服务的国家高新技术企业。公司集研发、生产、销售于一体。
主营业务涵盖：药用植物活性单体、标准对照品等天然化合物的技术研发及定制生产、销售，化合物高分辨质谱分析、化合物标定、化合物结构鉴定、中药材检测（CNAS认可）、药物杂质分离、中药新化合物发现与活性筛选研究、中药新药临床前系统研究、经典名方、改良型新药及同名同方药开发研究、组分中药的配伍研究及高端制剂研究等技术外包服务，成功打造了国内领先的天然药物分离纯化及中药创新药研发服务小试+中试平台。亦可提供药材研究、工艺研究、质量标准研究、稳定性研究、对比研究的技术服务。
