对照品使用中的常见问题及解决方案（二） ——对照品不出峰

液相色谱检测时，对照品为什么会“隐身”？这是一个常见且令人困扰的问题。以下从对照品、色谱条件、仪器、色谱柱四个方面为您详细剖析原因及解决方案：

一、对照品问题
原因一：对照品未溶解或溶解不完全
解决方案：选择合适的溶剂溶解对照品，或添加助溶剂（DMSO 或 DMF），确保对照品溶液澄清透明。

原因二：对照品配制浓度过低
解决方案：配制更高浓度的对照品溶液进行测试（注意不要超过柱容量）或增大进样量。

原因三：对照品降解
解决方案：根据对照品性质选择合适的储存条件或根据厂家说明书保存（如避光、避氧、低温、干燥）。

二、色谱条件问题
原因一：检测波长（检测器）选择不当，对照品在该波长下无紫外吸收或有较弱吸收。
解决方案：根据对照品结构式及其紫外吸收特征选择合适的检测波长（如无紫外吸收的化合物可选择蒸发光散射检测器）。

原因二：流动相极性与对照品极性差异较大，导致对照品在色谱上不保留（出峰过早与溶剂峰重合）或强保留（保留在色谱柱上不出峰）。
解决方案：调整流动相组成或比例，使其具有适当的保留能力（如提高有机相比例以增强洗脱能力，使保留时间提前）。

三、仪器问题
原因一：进样针堵塞、进样阀故障或进样操作不当等导致样品未进入系统或进样量不足
解决方案：检查并冲洗进样针，检查进样阀密封性；同时确认操作的正确性。

原因二：流路异常，如某流路进入气泡，导致流速不稳定或不泵液，从而不出峰。
解决方案：随时观察系统压力的稳定性，如压力不稳定需进行排查维修

原因三：检测器未开启或检测器故障，如检测器的部件损坏、光路堵塞等会导致无法检测到信号。
解决方案：对检测器进行检查和维修。可以通过检测过往检测正常的其他样品辅助判断。

四、色谱柱问题
原因一：色谱柱不适用，色谱柱类型与对照品性质不匹配，导致样品无法在柱内保留或分离。如使用反相色谱柱分析强极性化合物，从而不保留快速流出色谱柱。
解决方案：根据对照品性质选择色谱柱，对于强极性或离子型化合物，可选择亲水相互作用色谱柱（HILIC）或离子交换色谱柱等。